Вибір режиму автоклавування

У мікробіологічної практиці стерилізацію в автоклавах здійснюють при температурі в межах 111−138?, тобто 0,5 до 2,5 ати. Температура нижче 111? не може читатися надійної; температура вище 138?, як правило, не є необхідною, до того ж, чим вище тиск пара тим складніше умови експлуатації автоклава. При використанні автоклавів без вакуумних насосів найбільш надійними вважаються наступні режими стерилізації: 15−45 хв. при 121? (1 ати) і 10−38 хв. при 128? (1,5 ати). Мікробіологи найчастіше стерилізують середовища при 0,5 і 1 ати. 11] ,[14].

Температура і тривалість автоклавування живильних середовищ визначаються насамперед їх складом, термостійкістю або термолабільністю компонентів. Такі легко руйнуються субстрати, як молоко або желатинові середовища, а також субстрати, що містять цукру, вітаміни (пивне сусло, соки, дріжджовий автолізат та ін.) зазвичай стерилізують при 0,5 ати протягом 15−30 хв. М’ясопептонні середовища можна стерилізувати при 1,0 ати 20 хв. Середовища, що містять агар, стерилізуються важче, тому що стерилізація починається фактично після того, як агар розплавиться. Але і розплавлений агар вимагає для стерилізації вдвічі більше часу, ніж той же об'єм води. Насилу піддаються стерилізації в автоклаві різні порошки (гліцерин, вазелінове масло), оскільки вони погано передають тепло і дуже повільно прогріваються. Їх краще стерилізувати в сушильних шафах при 160? протягом 2 ч. або 1ч. при 170?. В цьому випадку шар масла або порошку в посудині не повинен перевищувати 1,5 см. Є субстрати в яких можуть бути суперечки, що відрізняються особливою термостабильністю. До них відноситься грунт, причому вона, крім того, і нагрівається з уповільненою швидкістю. Її зазвичай стерилізують при 1 ати, або один раз 2ч., Або два дні поспіль по1 ч., а іноді - при 2 ати 2ч. [14].

Вибираючи режим стерилізації, необхідно враховувати рН середовища. При кислій реакції багато речовин, що входять до її складу, можуть піддатися гідролізу. Чим нижче значення рН, чим вище температура й триваліше час стерилізації, тим інтенсивніше відбувається гідроліз. В результаті після стерилізації перестають застигати середовища з желатином і навіть з агаром. Якщо реакція середовища лужна, то при стерилізації випадають в осад солі заліза, карамелізується і стають непридатними для використання бактеріями цукру. В деяких випадках в процесі стерилізації змінюються рН сполуки. Так, якщо рН середовища з вуглеводами вище 7,0, то може відбутися її підкислення до рН 6,0. Особливо часто це спостерігається в присутності ксилози. Щоб уникнути таких явищ, рекомендуються вуглеводи, фосфати, солі заліза автоклавувати окремо у вигляді більш-менш концентрованих розчинів в дистильованій воді при тому значенні рН, яке забезпечує цілісність речовини. Після стерилізації розчини стерильно об'єднують в потрібному співвідношенні. Таким прийомом роздільної стерилізації в мікробіології користуються досить часто, оскільки багато компонентів середовищ можна стерилізувати одним і тим же способом. [14].

Режим автоклавування в значній мірі залежить від обсягу стерилізується субстрату. Чим більше об'єм, тим більше часу при одній і тій же температурі (тиску) потрібно для забезпечення надійності стерилізації. Має значення товщина стінок і форма ємностей (табл. 2.1.).

Таблиця 2.1. Залежність тривалості стерилізації рідин від обсягу посудин

Після автоклавування середовища для перевірки стерильності витримують 2−3 діб в термостаті при 30?. Якщо в середовищах виявляється зростання мікроорганізмів, їх готують заново. 11].