Лабораторна діагностика аеромонозу коропових риб

Аэромоноз карпов (краснуха карпов, геморрагическая септицемия, инфекционная брюшная водянка, люблинская болезнь) — инфекционная болезнь карповых рыб, характеризующаяся воспалением кожного покрова, очагами кровоизлияний, водянкой, ерошением чешуи, пучеглазием, гидратацией мышечной ткани и всех внутренних органов. Регистрируют во всех странах Западной и Восточной Европы, Южной Америки и Индии.

Для бактериологического исследования берут только живую больную рыбу. В каждом случае исследуют не менее 5 экземпляров рыб с признаками болезни.

Бактериологическое исследование.

2.1. Высевы производят из асцитной жидкости, печени, почек, селезенки, из крови (отдельно из каждой пробы) на чашки с МПА (рН 7,2−7,4).

Заболевание характеризуется септическим течением, поэтому в посевах из крови и паренхиматозных органов, как правило, обильный рост культуры возбудителя.

Посев можно производить инокуляционной петлей, погружая её в обследуемый орган и поворачивая несколько раз, или пинцетом с изогнутыми браншами.

Посевы инкубируют при 25−26°С в течение 48−72 часов. На МПА бактерии рода Psudomonas образуют бесцветные или серовато-белые полупрозрачные, круглые выпуклые колонии с ровными краями. На 3−4-е сутки отмечают образование желто-зеленого или оранжево-желтого флюоресцирующего пигмента. Ps. cyprinisepticum и некоторые штаммы Ps. fluorescens могут образовывать слизистые колонии.

При обнаружении на агаре характерного роста подозрительные колонии пересевают на среду Клиглера и через 18 часов культуры, давшие на этой среде щелочную реакцию (столбик и скошенная поверхность окрашивается в малиновый цвет), подвергают дальнейшему изучению. Для дифференциации возбудителей рода Pseudomonas от бактерий сходных с ними родов (табл. 1) определяют оксидазную активность, способность расщеплять глюкозу в среде Хью-Лейфсона (тест окисления-ферментации).

Для определения оксидазной активности на небольшой участок скошенной поверхности с культурой наносят каплю смеси реактивов 1%-ного водного раствора диметилпарафенилендиамина (гидрохлорида или оксалата) и 1%-ного раствора (а-нафтола и 60° спирте-ректификате. Оксидазоположительные колонии окрашиваются в синий цвет через 30−60 секунд. Оксидазоотрицательные культуры дальше не исследуются.

При проведении теста окисления-ферментации (О/Ф) исследуемую культуру засевают уколом до дна в пробирку с 6 мл среды Хью-Лейфсона. Посевы инкубируют 96 часов при 25−26°С. Возбудители псевдомоноза окисляют глюкозу в аэробных условиях, поэтому среда в верхних слоях становится соломенно-желтой, нижний слой остается без изменения ферментация не происходит.

В случае сомнительного результата теста окисления-ферментации проводят дополнительные исследования декарбоксилазной активности выделенных культур. Исследуемую культуру высевают в четыре пробирки со средой Меллера или Биргер-Крушинской, в три из которых добавлено по одной из аминокислот (аргинин, лизин, орнитин), четвертая — контрольная. Затем на поверхность среды наслаивается стерильное вазелиновое масло (примерно I мл). Посевы инкубируют 4 суток при 25−26°С. Возбудители псевдомоноза обладают аргинин-дегидролазой, но не декарбоксилируют лизин и орнитин, в результате чего цвет среды Биргер-Крушинской в пробирке с аргинином становится синим. Цвет среды Меллера изменяется до фиолетового, при слабой реакции становится голубовато-серым.

Для определения видовой принадлежности культур проводят высевы на среды Гисса с маннитом, сахарозой, мальтозой, лактозой.

Подвижность культуры определяют при посеве на среду Хью-Лейфсона. Подвижные культуры растут диффузно, вызывая помутнение всей среды, неподвижные — строго по уколу (Ps. fluorescenc f. capsulata).

Биологическое исследование.

3.1. Биологическую пробу ставят на 6−10 клинически здоровых рыбах того же вида и возраста, от которых выделена культура возбудителя, завезенных из хозяйства, благополучного по данному заболеванию.

Двухсуточную бульонную культуру вводят 4−6 рыбам внутримышечно и 4−6 рыбам внутрибрюшинно в дозе 0,3 мл. Рыбам массой более 150 г вводят по 0,5 мл культуры. Температура воды в аквариуме, где содержится зараженная рыба, должна быть в пределах 15−25° С.

Одновременно ставят контроль на 6−10 рыбах, которым вводят стерильный МПБ в тех же дозах. Срок наблюдения 16 суток.

В случае проявления заболевания или гибели рыб проводят бактериологическое исследование.

Биологическую пробу считают положительной, если все зараженные рыбы заболевают и не менее 50% из них погибает с признаками псевдомоноза, а из крови и внутренних органов изолируют исходную культуру.

Лабораторный диагноз на псевдомоноз считают установленным при выделении культуры со свойствами, характерными для возбудителей болезни, и патогенной для подопытных рыб.