Цитохімічна реакція альдегідфуксину в панкреатичних клітинах В

Для цитохімічного визначення інсуліну в панкреатичних клітинах В шматочки підшлункової залози фіксували в рідині Буена. Рідину Буена готували шляхом змішування 15 мл насиченого розчину пікринової кислоти, 5 мл нейтрального формаліну, 1 мл льодяної оцтової кислоти. Тривалість фіксації - 24 години [20−24].

Потім шматочки підшлункової залози проводили через спирти зростаючої міцності (70⁰, 80⁰, 90⁰, 96⁰, абсолютний спирти) — по 4 години в кожному. Абсолютний спирт отримували перемішуванням 96⁰ спирту з прокаленим мідним купоросом. Після цього шматочки залози витримували у двох ксилолах (по 15 хвилин в кожному), суміші 50% ксилолу та 50% парафіну (30 хвилин при 37⁰ С), двох рідких парафінах (по 1,5 години у кожному при 56⁰ С). Далі шматочки підшлункової залози заливали в парафін [23].

Із парафінових блоків підшлункової залози готували зрізи товщиною 5−10 мкм. Депарафінування зрізів проводили шляхом їхньої обробки у двох ксилолах (по 3 хвилини в кожному), потім відбувалась обробка в спиртах міцності, що знижується, (абсолютний спирт, 96⁰, 90⁰, 80⁰, 70⁰) — по 3 хвилини в кожному і промивали у водопровідній воді (5 хвилин) [25].

Після цього зрізи поміщали в окислювач (до порудіння) і відновник (до знебарвлення). Окислювач готували безпосередньо перед його застосуванням у такий спосіб: змішували одну частину 2,5% розчину перманганату калію, одну частину 5% розчину сірчаної кислоти та 4 частини дистильованої води. У відновник зрізи поміщали без попереднього їхнього промивання у водопровідній воді після окислювання. Відновником слугував 2,5% розчин щавлевої кислоти або бісульфату натрію до повного знебарвлення [23].

Після відновлення зрізи промивали в дистильованій воді протягом 5 хвилин та фарбували протягом 6 хвилин розчином альдегідфуксину, у герметично зачиненій посудині. Барвник готували таким чином: розчиняли 250 мг альдегідфуксину в 25 мл 70⁰ спирту, потім ще додавали 75 мл 70⁰ спирту і 1 мл льодяної оцтової кислоти. Після закінчення зазначеного строку фарбування зрізи витягали з посудини, на них наносили трохи крапель 96⁰ спирту. Зрізи промивали протягом 5 хвилин у водопровідній воді. Потім зрізи проводили через 96⁰ спирт (1−2 хвилини), абсолютний спирт (1−2 хвилини), два ксилоли (по 1−2 хвилині в кожнім) і занурювали в бальзам [29].

На препаратах в цитоплазмі панкреатичних клітин В виявлялася синьо-фіолетова зернистість. ЇЇ кількість слугувала показником вмісту в клітинах гормону інсуліну [30].